トレーニング概要

　組織・細胞など複雑で厚みのある生体試料の非晶質凍結法として「高圧凍結法／Waffle Method」が用いられるようになりました（詳細は、https://www.leica-microsystems.com/science-lab/life-science/the-waffle-method-high-pressure-freeze-complex-samples/ をご確認ください）。試料を、200メッシュの金厚膜カーボングリッドに配置して、このグリッドを非常に良く研磨された2枚の試料キャリアで挟んだ状態で高圧凍結します（下図参照）。高圧凍結では、通常、平板試料キャリアの形状により厚さ200µm程度のディスク状に試料がガラス化されます。Waffle Methodでは、EMグリッドがスペーサーとなることから、試料の厚さを約20～30µmに薄くすることができます。その結果、凍結試料ラメラを作製する際、Cryo-FIB Millingする体積を大幅に小さくできる利点があります。試料キャリアは、高圧凍結用の平板試料キャリア・タイプB（Cu/Au 6 mm、Type B 0.3 mmキャビティ）、またはメンブレンキャリアを用いることができます。
 
　本トレーニングでは、試料の凍結固定（高圧凍結法／Waffle Method）から、クライオSEM観察までの実践的な実習を行います。クライオSEMは、生体組織や培養細胞などの生物系試料ばかりでなく、乳製品を始めとするエマルション、インクなどのスラリー、水や有機溶媒を主要構成成分とする液状材料、およびゲル状試料に関して、化学固定をすることなく流動性のある試料を急速凍結することにより、液体を含んだ状態の微細構造を観察できる非常に有用な手法です。化学固定、脱水・乾燥、樹脂包埋など、一般的な試料調製の過程で失われてしまう様々な可溶性物質をすべて保存したまま、本来の状態に近い試料の観察をすることが可能です。バイオ系からマテリアル系まで非常に幅広い研究分野において、液体を含む試料の微細構造観察に関して、今後の発展が大いに期待されます。

受講対象

高圧凍結法／Waffle Method、クライオSEM観察に興味のある方

研究・開発・評価などの仕事でクライオ電子顕微鏡法に従事している方

主な使用装置

・高圧凍結装置：Leica Microsystems EM HPM 100（現行モデル：Leica EM ICE )

・クライオウルトラミクロトーム：Leica Microsystems EM UC7/FC7T（現行モデル：Leica UC Enuity Cryo）

・高真空コーティング装置：Leica Microsystems EM ACE600FF（凍結割断システム構成）

・トランスファーシステム：Leica Microsystems EM VCT500

・電子顕微鏡 クライオSEM：JEOL JSM-IT800 （Leica EM VCT500 Cryo-Stage組込）

トレーニングスケジュール