Zeiss Lightsheet Z.1

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主な特徴

  • マルチアングル撮影、タイリング撮影が可能
  • 縞状の影を軽減するためのピボットスキャン機能あり
  • インキュベーション機能:温度 1042 ℃CO2 0〜10 %
  • 可視化、解析ソフトとして Imaris 及び arivis Vision4D を使用可能
  • カメラは最大30 fps
  • 同時撮影は 2チャンネル、フィルタキューブ変えて撮影することでより多色の撮影も可能
  • 対応する屈折率:1.33(水, 培養液)、1.38(Scale, CUBIC-1等)、1.45(SeeDB, CUBIC-2等)
  • 完全同時に2色、シーケンシャルスキャンで3色以上撮影可能
各種スペック
  • 励起レーザー 405-20, 445-25, 488-30, 514-20, 561-20, 638-75 (nm-mW)
  • sCMOSカメラ PCO.Edge 1920 ×1920 pixels, 2
  • 変倍ズーム機能 0.362.5倍(0.7倍以下はケラレます)
  • 1フレーム最小時間 49.08 msec

レーザーブロッキングフィルタ(LBF, 励起光をカットするノッチフィルタが検出用対物レンズ直後に入っている)
セット1
  • 405 / 488 / 561 / 640
セット2
  • Plate
  • 405 / 488 / 561
  • (empty)
  • 405 / 488 / 640
  • 445 / 514 / 640
  • 405 / 514

セカンダリビームスプリッタ(SBS,蛍光を2台のカメラに分配する)
セット1
  • BP420-470, BP505-545 (DAPI-GFP)
  • BP420-470, BP575-615 (DAPI-RFP)
  • BP505-545, BP575-615 (GFP-RFP)
  • SP550, LP585 (Universal green-red)
  • BP575-615, LP660 (RFP-DRAQ5)

セット2

  • BP460-500, BP525-565 (CFP-YFP)
  • BP460-500, BP575-615 (CFP-RFP)
  • BP525-545, BP575-615 (YFP-RFP)
  • BP525-565, LP585 (YFP-mCherry)
  • BP525-565, LP660 (YFP-DRAQ or Toto-3)

検出用対物レンズ
n= 1.33
  • 5×/0.16 WD= 5.1 mm
  • 20×/1.0 WD= 2.4 mm
  • 40×/1.0 WD= 2.5 mm
n= 1.38
  • 5×/0.16 WD= 5.1 mm
  • 20×/1.0 WD= 5.6 mm
n= 1.45用:
  • 5×/0.16 WD= 5.6 mm
  • 20×/1.0 WD= 5.6 mm

透明化剤について
  • BABBや3DISCOのような有機溶媒系の透明化剤は対物レンズやチャンバーを侵すので使えません。水系のものを使ってください。
  • Lightsheet Z.1で観察する上で試料の屈折率は重要です。ScaleやCUBIC-Iに合わせた n=1.38用、SeeDBやCUBIC-IIに合わせたn=1.45用の対物レンズとチャンバーが用意されています。1.38用、1.45用の20x対物は、補正環でプラスマイナス0.03まで、つまりそれぞれ n=1.35〜1.41、n=1.42〜1.48への対応を謳っています。
  • CUBIC-R+は屈折率1.52で対応範囲外ですが、5x対物、20x対物ともに、さほど問題なく見えています。
  • 観察の際、試料と試料チャンバー内の屈折率を合わせるため、チャンバーを透明化剤で満たす必要があります。容量は約20 mlです。

大きな試料について
  • 透明化した脳を丸ごと見たいという問い合わせをよくいただきますが、対物レンズの作動距離やチャンバーの寸法の関係で、容易に観察できるのは厚さ5 mm、幅1 cm弱程度が上限です。つまり成体マウスの脳をまったくトリミングせず丸ごと見るのは困難です。ある程度工夫次第のところもありますが、現状では、がんばって片半球くらいまでです。

FEPチューブについて
  • 試料の担体として、水とほぼ同じ屈折率のフッ化エチレンプロピレン(FEP)チューブを使う方法があります。現在、以下の3種類を用意してあります。
    • 型番 外径 × 内径 (mm)
    • TF040 1.4 × 0.8
    • TF060 2.0 × 1.2
    • TF170 6.5 × 5.5