-文部科学省科学研究費補助金「特定領域研究」細胞核ダイナミクス核内脂質シグナル及び核移行蛋白質の可視化システムを用いた細胞周期制御機構の解明-

核内脂質シグナル及び核移行蛋白質の可視化システムを用いた細胞周期制御機構の解明

神戸大学・バイオシグナル研究センター　白井　康仁　平成１７－１８年度

　我々は、ジアシルグリセロール（DG）をリン酸化しフォスファチジン酸（PA）を産生するジアシルグリセロールキナーゼ（DGK）の動態を生細胞内で可視化することに成功し、DGKγ及びDGKαが核内に移行することを見い出した。この核内移行には活性は必要ではなく、脂質結合領域であるC1ドメインが核移行シグナルとして機能していること、核内のDGK活性が細胞周期に関与していることを明らかにした。また、DGKαは血清中の成長因子によって核-細胞質間をシャトリングし、このシャトリングはc-Src/c-Ablカスケードによるチロシンリン酸化によって制御されていることも明らかにした（図）。さらに、細胞周期に伴う核内のDG及びPA量変化及び動態を可視化するために、DGに結合するPKC δC1ドメインと、PAに特異的に結合するRaf -1キナーゼのPA結合領域に核局在化シグナル及び蛍光蛋白質を融合させたペプチド性脂質プローブを作製した。

発表論文リスト：

Yamaguchi Y, Shirai Y, Matsubara T, Sanse K, Kuriyama K, Oshiro N, Yoshino K, Yonezawa K, Ono Y and Saito N. (2006) Phosphorylation and up-regulation of diacylglycerol kinase γ via its interaction with protein kinase C γ. J. Biol. Chem 281, 31627-31637.
Matsubara T, Shirai Y, Miyasaka K, Murakami T, Yamaguchi Y, Ueyama T, Kai M, Sakane F, Kanoh Hand Naoaki Saito. (2006) Nuclear transportation of diacylglycerol kinase γ and its possible function in the nucleus. J. Biol. Chem.281, 6152-6164.
Cheeseman LK, Ueyama T, Michaud MT, Kashiwagi K, Wang D, Flax LA, Shirai Y, Loegering, DJ, Saito N. and Lennartz MR.(2006) Targeting of PKC-ε during FcγR-dependent phagocytosis requires the εC1B domain and phospholipase C-γ1. Mol. Biol. Cell.17, 799-813.
Masukawa K, Sakai N, Ohmori S, Shirai Y and Saito N. (2006) Spatiotemporal analysis of the molecular interaction between PICK1 and PKC. Acta Histochem. Cytochem. 39, 173-181.
Sato K, Adachi T, Shirai Y, Saito N and Tomita Y. (2006) Local disassembly of actin stress fibers induced by selected release of intracellular tension in osteoblastic cells.J Biomech. Sci. Eng. 1, 204-214.
Adachi N, Oyasu M, Taniguchi T, Yamaguchi Y, Takenaka R, Shirai Y, and Saito N. (2005) Immunocytochemical localization of a neuron-specific diacylglycerol kinase β and γ in the developing rat brain.Mol. Brain Res. 139, 288-299
Abdel-Raheem IT, Hide I, Yanase Y, Shigemoto-Mogami Y, Sakai N,Shirai Y, Saito N, Hamada, FR, El-Mahdy NA, Elsisy AEDE,Sokar SS and Nakata Y (2005) Protein kinase C-α mediates TNF release process in RBL-2H3 mast cells. British J. Pharmcol.145, 415-423.
Ueyama T, Eto M, Tatsuno T, Kobayashi T, Shirai Y, Lennarts MR, Takrya R, Sumimoto H, and Saito N.(2005) Isoform-specific membrane targeting mechanism of rac during FcgR-mediated phagocytosis: Positive charge-dependent and independent targeting of mechanism of Rac to the phagosome.J. Immunol. 175, 2381-2390.
Shirai Y, BalsindeJ. and DennisE. (2005) Localization and Functional Interrelationships Among Cytosolic Group IV, Secreted Group V, and Ca²⁺-Independent Group VI Phospholipase A₂s in P388D₁ Macrophages Using GFP/RFP Constructs. Biochemica Biocphyca Acta.1735, 119-129.
Fukunaga-Takenaka R, Shirai Y, Yagi K, Adachi N, Sakai N, Merino E, Merida I and Saito N. (2005) Importance of chroman ring and tyrosine phosphorylation in the subtype-specific translocation and activation of diacylglycerol kinase alpha by d-α-tocophenol. Genes to Cells. 10, 311-319.