蛍光タンパク質Kaedeは光照射によって緑から赤にスペクトルが変化するため、細胞内の限局された部位でマーキングを行うことができる。我々はKaedeがDsRedと同様に単量体の状態では分解されやすいが、２量体形成によって分解を免れ安定化することを見いだした。そこでタンパク質間相互作用の検出に応用することを目的として、このシステムに至適化したKaedeの変異体の作成を進め、単独の状態でのバックグラウンドの蛍光は低く、かつ相互作用が起こった場合には十分な蛍光強度が得られるKaede2と名付けた新しい変異体の作成に成功した。

　新しいFRET計測用の蛍光タンパク質セットを開発し、非常に高い効率でFRETが検出できるようになった。これを10種類のユビキチン様タンパク質の解析に応用し、その性質からいくつかのグループに分類できることを示した。

　フローサイトメーターで蛍光を測定する際に、FL-AとFL-Wという複数のパラメーターを組み合わせた解析手段を用いることにより、生きたままの動物細胞において、細胞核への蛍光局在の程度を簡便かつ定量的に測定する手法を確立し特許として出願した。

発表論文リスト：

1. Tomura M, Yoshida N, Tanaka J, Karasawa S, Miwa Y, Miyawaki A, Kanagawa O. Monitoring cellular movement in vivo with photoconvertible fluorescence protein "Kaede" transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105, 10870-10875, 2008
2. Kagoshima H, Nimmo R, Saad N, Tanaka J, Miwa Y, Mitani S, Wooland A. The C. elegans CBFβ homologue BRO-1 interacts with the Runx factor, RNT-1, to promote stem cell proliferation and self-renewal Development 134, 3905-3915, 2007
3. Shigematsu Y, Yoshida N, Miwa Y, Mizobuti A, Suzuki Y, Tanimoto Y, Takahashi S, Kunita S, Sugiyama F, Yagami K-I. Novel embryonic stem cells expressing tdKaede protein photoconvertible from green to red fluorescence. Int. J. Mol. Med. 20(4), 439-444, 2007
4. Uchida D, Onoue T, Tomizuka Y, Begum NM, Miwa Y, Yoshida H, Sato M. Involvement of an autocrine stromal cell derived factor-1/CXCR4 system on the distant metastasis of human oral squamous cell carcinoma.Mol. Cancer Res.5(7), 685-694, 2007
5. Ueno A., Miwa Y., Miyoshi K., Horiguchi T., Inoue H., Ruspita I., Abe K., Yamashita K., Hayashi E. andNoma T. Constitutive Expression of Thrombospondin 1 in MC3T3-E1 Osteoblastic Cells Inhibits Mineralizaion Journal of cellular physiology209(2), 322-332, 2006
6. Shibata M-A, Miwa Y, Miyashita M, Morimoto J, Abe H, Otsuki Y. Electrogene transfer of an Epstein-Barr virus-based plsmid replicon vector containing the diphtheria toxin A gene suppresses mammary carcinoma growth in SCID mice, Cancer Sci. 96, 434-440, 2005

＜総説＞

1. 三輪佳宏, 田中順子, 藤村浩史, 川澄涼子　「蛍光タンパク質を用いたマルチカラーフローサイトメトリー」生化学, 77(9), 1204-1208 2005
2. 吉田直樹、田中順子、三輪佳宏「デグラトンプローブを用いた生きたマウス体内での蛍光分子イメージング」、細胞工学、25(9), 1023-1026. 2006
3. 田中順子、三輪佳宏　バイオテクノロジージャーナル　「フローサイトメトリーのすすめ？」6(3),377-3822006

＜図書＞

1. 蛍光・発光試薬の選び方と使い方　三輪佳宏　編